Bilirubin u prahu CAS 635-65-4uglavnom se ekstrahira iz žuči. Bilirubin je netopljiv u vodi, topiv u organskim otapalima kao što su benzen, kloroform i ugljikov disulfid, a slabo topiv u etanolu i eteru. Bilirubin se također može otopiti u vrućoj mješavini etanola i kloroforma. Natrijeva sol bilirubina lako je topljiva u vodi, ali njegove kalcijeve, magnezijeve i barijeve soli su netopljive u vodi. Bilirubin je monoklinski kristal svijetlonarančaste ili duboko crvenkastosmeđe boje. Njegova suha krutina je relativno stabilna, a otopina kloroforma je također relativno stabilna u mraku. Nestabilan je u alkalnoj otopini (kao što je 0.1mmol/L natrijev hidroksid) ili kada se susreće s ionima trovalentnog željeza i brzo se oksidira u biliverdin. Bilirubin se može vezati za glicin, alanin ili histidin. Dodavanje serumskih proteina, vitamina ili EDTA može stabilizirati bilirubin.
1. Priprema kalcijeve soli metodom neizravne ekstrakcije kalcijeve soli: dodajte 3-3.5 puta zasićenog supernatanta vapnene vode u svježu svinjsku žuč uz miješanje, a zatim nastavite miješati 5-10min, Ph{ {4}}, kada se zagrije na 50 stupnjeva, skinite pjenu gazom, nastavite zagrijavati do vrenja, ostavite 2 minute, ohladite, filtrirajte i dobijete kalcijevu sol. Priprema konačnog proizvoda bilirubina: uzmite kalcijevu sol i dodajte 0.8 puta više vode da napravite pastu, prosijte je kroz 30-40 mrežicu, dodajte 0,3% antioksidansa u filtrat, dodajte sol i kiselinu da podesite pH na 1,5, ostavite da stoji 4 sata, filtrirajte, dodajte 8-10 puta količinu 80% etanola u filterski kolač, zdrobite i dobro promiješajte, dodajte antioksidans, ostavite da stoji preko noći i dobijete talog. Dodajte 4-6 puta količinu od 80% ili više etanola i antioksidansa, promiješajte i namačite preko noći. Ponovite ovaj postupak 3-4 puta i osušite talog ispod 70 stupnjeva kako biste dobili gotov proizvod bilirubina.
Taloženje kalcijeve soli [HCl, teški natrijev sulfit] → taloženje [etanol, teški natrijev sulfit] → taloženje [70 stupnjeva] → produkt bilirubina.
2. Priprema kalcijevog bilirubinata metodom ekstrakcije kloroformom: Svježa svinjska žuč se namjesti na pH 12 s natrijevim hidroksidom, zagrije do vrenja, doda se otopina kalcijevog klorida, zatim se zagrije do vrenja, ohladi, filtrira da se dobije kalcijev bilirubinat. Svinjska žuč [NaOH, CaCl2] → [pH 12, 100 stupnjeva] Priprema bilirubinskog praha CAS 635-65-4 kalcijeva sol bilirubinski gotov proizvod: bilirubinska kalcijeva sol se podešava na pH 1-2 s klorovodičnom kiselinom 1:1, kisela voda se ispusti, kloroform se ekstrahira kloroformom, ispere bezvodnim etanola, a otopina se ostavi na oko 5 stupnjeva da se dobije bilirubinski gotov proizvod.
Kalcijeva sol bilirubina [HCl] → [pH1-2] kiseli spoj [kloroform, bezvodni etanol] → [5 stupnjeva] bilirubin gotovi proizvod
3. Poboljšana metoda kalcijeve soli za zakiseljavanje kalcijeve soli: uzmite svježu svinjsku žuč i dodajte 1% kalcijevog hidroksida, dobro promiješajte, brzo zagrijte do 90-97 stupnjeva, držite na toplom 10 minuta i filtrirajte da dobijete kalcijeva sol. Zagrijavanje na 40 stupnja izazvat će pojavu masnoće koja se može nježno ukloniti. Dobivena kalcijeva sol može se jednom isprati vrućom vodom kako bi se uklonio višak lužina i drugih nečistoća. Uzmite kalcijevu sol i dodajte više od 10 puta veću količinu vode kako biste je ravnomjerno raspršili. Dodajte 1% antioksidansa i miješajte (60 o/min) da biste dodali 1:2 klorovodičnu kiselinu kap po kap. U roku od 40 minuta dosegnite pH 2,0 i pričekajte da pH ostane nepromijenjen kako biste dobili kiselu tvar. Svinjska žuč [1% kalcijev hidroksid] → [90-97 stupanj, 15 min] Kalcijeva sol žuči [antioksidans, klorovodična kiselina] → [pH2,40 min] Ispiranje kiselom kiselinom alkoholom, ispiranje vodom: Zakiseljeni bilirubin ravnomjerno se raspršuje na sobnoj temperaturi s 10 puta većom količinom etanola, pH ne smije biti veći od 5, doda se 0,5% antioksidansa, promiješa se i ostavi oko 1 sat radi slojevanja. Prijeđite na gornji sloj alkoholne otopine i sakupite precipitirani bilirubin. Isperite bilirubin toplom vodom od 50 stupnjeva oko 5 minuta, sakupite plutajući bilirubin, brzo dodajte etanol za dehidraciju i uklonite etanol da dobijete sirovi bilirubin. Kiseli spoj [etanol] → [1h] taloži bilirubin [vruća voda na 50 stupnjeva] → [etanol] ekstrakcija sirovog bilirubina, isparavanje, kristalizacija i sušenje: Uzmite sirovi bilirubin i dodajte 10 puta kloroform da mućkate na 50 stupnjeva 10 minuta. Ako je potrebno, ekstrahirajte 2-3 puta, a ostatak bi trebao biti bijel. Ekstrakt kloroforma podvrgnut je vakuumskoj destilaciji dok se gotovo ne osuši, što je rezultiralo stvaranjem većine kristala bilirubina. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, dodan je etanol i dalje ohlađen na 4 stupnja tijekom 10 minuta. Kristali bilirubina su filtrirani i obrađeni bezvodnim etanolom ili eterom, nakon čega je uslijedilo sušenje u vakuumu da se dobije bilirubin visoke kvalitete.
Sirovi bilirubin [kloroform] → [10 min] otopina kloroforma [kristalizacija] → bilirubin visoke kvalitete
4. Priprema otopine za hidrolizu metodom ekstrakcije ionsko-izmjenjivačke smole: Uzmite svježu kravlju žuč, filtrirajte je pomoću gaze, dodajte 2 mol/L otopine natrijevog hidroksida kako biste podesili pH na 10 uz miješanje, prokuhajte i filtrirajte kako biste dobili hidrolizat.
Adsorpcija i eluacija žučne kiseline kolonom smole otopine hidrolize: Ulijte prokuhanu otopinu hidrolize u prethodno zagrijanu kolonu smole sve dok boja efluenta ne postane tamnija i adsorpcija ne bude zasićena.
Dodajte hladnu vodu dok temperatura unutar kolone ne padne na sobnu temperaturu, a zatim dodajte razrijeđenu otopinu natrijevog bisulfit hidroklorida s vrha kolone kako bi pH efluenta bio 1.
Isprati sa 75% etanolom, sakupiti kada eluens postane tamnozelena mutna otopina i ispirati dok se efluent ne razbistri i pH ne bude blizu neutralnog. Ponovno isprati s 95% etanolom.
Prikupiti etanolsku otopinu za ispiranje za pripremu žučne kiseline. Otopina za hidrolizu [kolona za ionsku izmjenu] → [75% etanol, 95% etanol] Etanol eluent za eluiranje bilirubina, koncentraciju i sušenje: Otpustite sav 95% etanol iz kolone, potopite u kloroform 10 minuta i sakupite kloroform eluent dok ne pojavljuje se žuta boja.
Destilirajte kloroformski eluent do gotovo suhoće, dodajte bezvodni etanol i nastavite s prikupljanjem dok ne nestane kloroforma. Filtrirajte dok je vruće, sakupite bilirubin, osušite i dobijete gotov bilirubinski proizvod.
Yolanda
Mobitel: +86 -29-86107037-8012
Email:sales9@konochemical.com
Tel/Wechat: 18729555803